病原体检测主要是用暗视野显微镜和镀银染色,确认试验是指用于验证筛查试验或诊断试验结果的试验

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王露楠教授表示,感染性疾病检测临床应用可分为筛查试验、诊断试验、确认试验和治疗监测四方面。筛查试验是指用于筛查的定性试验必须具有高敏感性以确保感染病原体被检出;诊断实验指用于临床某种特定疾病或状况是否存在的诊断;确认试验是指用于验证筛查试验或诊断试验结果的试验;治疗监测是指用于判定治疗效果的检测。

为提供更具参考性的中国证据及使用经验,四川大学华西医院联合全国其它14家医院共同开展了“罗氏诊断新一代ElecsysR
Syphilis梅毒螺旋体抗体检测试剂性能比对多中心研究”,旨在自然条件下比较ElecsysR
Syphilis检测试剂与已在国内上市的其它四种梅毒检测试剂的灵敏性与特异性。共纳入13,767例常规随机样本,是全球样本最多的试验之一。该研究结果表明,ElecsysR
Syphilis在所有比对组常规随机样本中的敏感度均达到100%,特异性也更优异;ElecsysR
Syphilis在所有比对组“临界”样本中的假阳性和假阴性结果更少。

重视感染性疾病血清学检测 加强性能验证及质量控制
近日,在第十一届全国检验年会期间,卫计委临检中心王露楠教授与来自全国检验、感染领域近200位专家就“感染性疾病血清学检测的性能验证及质量控制”为主题进行了深入探讨与分享,四川大学华西医院教授王兰兰担任会议主席。

2015年,Clinical and Vaccine
Immunology杂志发表了一项由全球6个国家8家研究中心参与的梅毒检测国际多中心研究结果,四川大学华西医院是8家研究中心之一,且国内只有此中心提供相应数据,参加了欧洲同步的性能评估。结果显示:与其它方法学梅毒检测试剂相比,罗氏诊断ElecsysR
Syphilis梅毒螺旋体抗体检测在灵敏度、特异性、临床样本敏感性等综合性能表现最佳,并且可100%检测出不同分期梅毒感染样本。

在会议讨论环节,针对发光法初检梅毒呈阴性,初检后即刻复检TPPA呈阳性,三个月后再次复检TPPA呈阴性的样本,王露楠教授表示,“免疫学检测的影响因素是多方面的,如炎性反应会对TPPA检测产生影响,应考虑静置样本后再进行检测,所以推荐TPPA作为筛查后的确认检测。”关于假阴性,王露楠教授指出,“此现象源于检测试剂在生产过程中的抗原选择及试剂的方法学,无论发光法还是ELISA,都可能存在假阴性情况,之前讲丙肝感染的复杂性,针对不同抗原检测的抗体会有不同情况,梅毒检测复杂性与丙肝类似,一些特殊的抗原产生对应抗体片断很难检出。就感染性疾病检测而言,不存在灵敏度100%的试剂,每种试剂都存有漏检可能,须尽可能使用灵敏度高的试剂。”

梅毒防控重在检测策略电化学发光法成主流

就梅毒检测这一问题,王兰兰教授认为:“实验室在做梅毒检测时会遇到较多问题,用ELISA方法检测,结果灰区时会带来临床纠纷,因此目前很多医院使用发光法检测梅毒。作为检验人员须了解所选择的检测方法学及试剂的性能优势所在,如临床灵敏度、分析灵敏度等。”

血清学检测包括非梅毒螺旋体抗原试验和梅毒螺旋体抗原试验。前者属于非特异性抗体检测,这可能会在自身免疫性疾病患者或孕妇中呈假阳性以及在晚期患者中呈假阴性。后者属于特异性检测,这类方法检测的是梅毒螺旋体特异性抗体,特异性及敏感度均较高。

对于如何界定筛查试验和诊断试验,王露楠教授表示,“在做术前感染性疾病筛查时,以筛查为目的,这时要求试剂具备高灵敏度,但有可能特异性相对不很高,出现假阳性。就诊断试剂而言,因受检测人群不同,诊断试剂针对有可能感染人群,意味着感染可能性较高。因此,要树立的观念是,应着重强调试剂的用途,检测不同人群时应明确性能指标的关注点。”

2016年,微生物学领域经典期刊Journal of Clinical
Microbiology杂志发表了一项对六种自动化梅毒螺旋体抗体检测方法的比较研究结果,对比其它方法学梅毒检测试剂,ElecsysRSyphilis梅毒螺旋体抗体检测的敏感性、特异性和一致性表现优异,其中,敏感性达到99.4%,特异性达到100%,一致性是99.8%,无一例假阳性结果和漏检情况发生。

王露楠教授表示,实验室人员对设备系统的熟悉程度及用于性能验证的样本是性能验证的关键因素。性能验证的关键性能指标包含精密度、分析灵敏度、临床灵敏度、分析特异性和临床特异性。关于精密度,由于待评价方法不同,影响浓度接近临界值样本检测结果的精密度偏差针对分析灵敏度,王露楠教授指出,单次检测没有检测出待测物,并不意味着分析灵敏度没达到要求,单次检测出待测物也不意味着达到要求。验证检测下限通过系列稀释,发现检测限以上和检测限以下符合率存在变化,理想的分析灵敏度确认曲线是通过软件统计分析得出来的,这是分析灵敏度检测下限认证的重要方法。同时,分析灵敏度验证是确定室内质控浓度的重要依据。

日前,在“2017中国医师协会检验医师年会暨第十二届全国检验与临床学术会议”上,四川大学华西医院实验医学科陶传敏教授分享了国际权威梅毒管理指南及国内外大型研究对于梅毒实验室检测方法和标准检测流程的临床应用评估及推荐,就梅毒感染的实验室检测策略及不同流程的应用进行了深入分析与探讨。

王露楠教授提出,近年来,实验室及检验行业从业人员对检测性能验证的认可逐渐提高,实验室人员应依据性能评价的结果判断,不仅仅关注呈现指标,也须了解实验室内检测系统、性能优劣所在及检测结果的报告方式等。

目前,对于梅毒的实验室筛查与诊断流程,越来越多地倾向于用反向检测流程。美国疾病控制中心发布的《2015性传播疾病治疗指南》提出反向流程对患者诊断更为全面,能够检测出既往治疗过、未治疗或不完全治疗的梅毒患者,以及低感染率人群的假阳性情况。《2014欧洲梅毒管理指南》推荐TT作为单独的初筛方法,并应采用全自动EIA/CIA,NTT只能检测到现症梅毒,相比TT会漏检早期的梅毒感染。《2015英国梅毒管理指南》也推荐EIA/CLIA作为初筛方法,同时检测免疫球蛋白M和免疫球蛋白G,并特别提到初筛阳性后再用另一种TT方法进行确认。

实验室检测流程简介和选择

陶教授指出:“临床上有一些潜在因素,如合并其它传染病、自身免疫性疾病、肿瘤、妊娠等,可能会干扰到梅毒的实验室检测结果,因此,选择抗干扰能力强的检测方法对于检测结果的准确性至关重要。”ElecsysR
Syphilis梅毒螺旋体抗体检测采用抗干扰模式,可有效避免交叉反应,针对干扰样本的评估研究显示,具有很好的特异性与灵敏度,对人类免疫缺陷病毒感染、EB病毒感染和莱姆病的特异性均达到100%。

在本次会议上,王露楠教授对感染性疾病血清学检测的性能验证及质量控制进行了介绍,建议针对不同检测目的,将筛查试验和诊断试验区别应用,尤其对性能验证的主要指标及应用、检测流程介绍和选择等方面进行了细致翔实的阐述。各位专家积极参与会议,讨论罗氏诊断传染检测血清学标志物的优异性能,及其可为实验室医生、临床医生、传染病患者带来的诸多获益。

梅毒实验室检测方法主要分成三大类:病原体检测、核酸检测和血清学检测。病原体检测主要是用暗视野显微镜和镀银染色,方法繁琐不适合实验室常规检测;核酸方法和病原体检测都受病原体在局部的影响,容易发生漏检。因此,血清学检测是实验室诊断梅毒的主要手段。

王露楠教授指出,感染性疾病血清学检测的流程选择与确定,应根据检测目的确认。以梅毒为例,其检测流程相对较复杂。美国和欧洲指南中关于梅毒检测流程的推荐也不尽相同。根据目前实际使用情况,美国的大型实验室和欧洲的主要实验室都逐渐采取了以梅毒特异性抗体检测为初步实验,以梅毒非特异性抗体检测为补充实验的检测流程。实际操作中需根据最初性能验证结果制定符合各自实验室要求的检测流程。如以筛查为目的,建议选择灵敏度较高的试剂作为起点,当然这一过程中假阳性问题不可忽视,建议阳性样本复检。如以诊断为目,特异性则需非常好。可见,性能验证结果对检测流程的制定至关重要。

哪些网赌平台信誉好,梅毒螺旋体抗原极不稳定,试剂性能的优异取决于更高的设计标准。对于免疫试剂的设计,抗原的筛选和制备工艺需要非常考究。罗氏诊断对抗原组合进行严格筛选和评估,最终选取了最有优势的抗原成分进行重组;同时优化了抗原序列,以实现试剂的稳定性和特异性,并采用了易大规模生产的高可溶性抗原,配合罗氏专有的解决方案,即抗原伴侣的应用,与天然抗原极度接近的表位的表达,实现只与抗原伴侣结合,不和特异性抗体结合,从而降低假阳性率。罗氏诊断ElecsysR
Syphilis梅毒螺旋体抗原特异性抗体电化学发光检测试剂盒于 2014 年 8
月正式在中国获批上市。该技术使用双抗原夹心法检测梅毒螺旋体总抗体,血清样本仅需10μL,在18分钟时间内即可完成整个检测过程,是目前可靠、高效的梅毒特异性检测方法。

关于分析特异性,王露楠教授提出,交叉反应和类风湿因子是可能影响分析特异性的两个因素,人群和流行率则是影响临床特异性的两个因素。如疾病发病率高,新感染者增加,窗口期人数增加,应选择对血清转换较敏感的方法,如抗原/抗体联合检测、核酸检测等。当疾病流行率上升时,人群中真阳性数增加,为避免假阴性结果,应选择灵敏度高的试剂。性能验证的结果是开展室内质控和制定结果报告流程的依据。

梅毒实验室检测流程主要包括传统检测流程和反向检测流程,两者的区别在于采用哪一种方法作为初筛的检测手段。传统检测流程是先进行NTT,结果阳性的患者再进行TT,结果阳性确认新感染或曾经治疗过;反向检测流程反之,对于TT结果阳性的患者进行NTT,若结果阴性再进行第二种TT检测,结果阳性则表示近期再次感染或曾经治疗过。现在还有一种是欧洲疾病预防控制中心流程,这是一个更简化的反向流程,先进行TT,结果阳性的患者直接再进行第二种TT检测。

陶传敏教授指出:“我国现在绝大部分实验室和血站主要是用反向检测流程,用特异性抗体首先开始进行筛查,对于筛查阳性的患者建议做非特异性检测,同时结合临床表现和流行病学史进行诊断。对性病门诊患者没有必要区分反向流程和传统流程,应该建议患者同时做这两类不同的实验室检测,这样可以节约时间。”

《中国科学报》 (2017-08-03 第6版 前沿)

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